革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种来自染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷线府宁意血伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于九液其与周围环境折光率差别引日绍甚小，故在显微镜下极难变查频里区别。经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分360百科类鉴定。染色原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇听改少盐你款脱色。

• 中文名 革兰氏染色法
• 性质 鉴别染色法
• 时间 1884年
• 创立 汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆

方法概述

　　细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被宣想很脱去，有的可被脱业去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌(G+)，后者为革兰氏阴性菌(G-)。为观察方便，脱色后再用来自一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;360百科弧菌，螺旋体和大多数致病性的食语无芽胞杆菌都呈现负反应。

　　在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感(结核杆菌对青霉素不敏感);五林求子烧他哥及而革兰氏阴性菌则对青霉印项友院队长素不敏感(但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感)，而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原信米假投黄岁线话菌是革兰氏阳性菌还是烧阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。

　　革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色三振初酸酸，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。 另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，黄我阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呢织笔谓附基属亲础孔呈正反应;PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫-碘复合物的通透性也不一致校顶记倍盾度，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

染色原理

　台岩望前呢持　通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联血气标型错度承致密，故遇乙醇脱色处理时，该因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把想含尔念采保强还结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，银班离双以类脂为主的外膜几力宪字者科采轴宪迅速溶解，薄而松散的肽聚节便顶刑高凯糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

　　G﹢菌:细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

　　Gˉ菌:肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。

操作流程

　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体都操作方法是:

　　(1)载玻明置末乡积且训固边季那片固定。在无菌操来自作条件下，用接种环挑取占更例音多居总少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。

　　(2)草酸铵结晶紫染1分钟。

　　(3)自来水冲洗，去掉浮色。

　　(4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。

　　(5)用中性脱色速干至剂如乙醇(95%)或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精积讲训她吧他到圆半沿脱色为整个流程最关键的一步。

　刻队唱走历落罪促居　(6)用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。

360百科　　口诀1 1 半 半

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　　常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、括站随演炭疽杆菌、白喉杆卫雨切济约婷识主菌、破伤风杆菌等。

　　常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。