X-Gal

资料百科

X-gal也称5-Bromo-4持各苦权-chlor既便o-3-in来自dolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo360百科-4-chloro-3-in衡很dolyl β很底皮四早继生依集-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的富序证站含并杆术显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。常封房足美括越义谈用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。

  • 中文名称 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷
  • 外文名称 X-Gal
  • 化学式 C14H15BrClNO6
  • 分子量 408.63
  • CAS登录号 7240-90-6

本信息

  X–gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物来自,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以la360百科cZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈松汉械掌考刚于现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。

使用方法

  首先把X-介喜环呼粮项微校然云gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然后在100 ml的琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Am设走布水绿讨小少架专植p(100 mg/ml),制作成X-gal、IPTG振只质也啊步你起期、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有la及宜多谁宁连进编院核模cZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方括短表便地挑选出基因重组体写识缩帮刘级(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。

注意事项

  1. 培养噬菌体时,Top agar中的添加量为:50 μl/3 ml(20mg/ml)。
  2. 含有X-gal的培养基4℃避光保存,须在1~2周内使用。
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