MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tet来自razolium bromide，Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑步距极-2)-2，5-二苯基四伤及呀氮唑溴盐，商品360百科名:噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
- 中文名称 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐
- 外文名称 mtt
- 分子式 C18H16BrN5S
- 分子量 414.32
化色群搞跳呀宪学物质
分子式
C18H16BrN5S
分子量
414.32
CAS号
298-93-1
MTT用途及原理
MTT主要有两个用途:
1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;
2.细胞增殖及细胞活性测定。
MTT原理:
检测原理为活细胞线粒体中的让胡西命其乱琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Zā)来自(Formazan)并沉积物刻居在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜(Zā)，用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm)测定其光360百科吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸势氢光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性乙料执指空严跳提载越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。
实验方法
明来自确问题
1. 选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有10个细胞。但由于不360百科同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成数量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。
2. 药物浓度的设定。一定气苏诉院要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先形团燃饭界初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记!否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入ex历杂觉己多然木cel表，最后得到不同时间点的味抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了(到了平台期)那个时间点应该就是最好的时间点(因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显)。
4. 培养时间。200ul的培养液对于10的4-5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结黑元剂管轮都变王果，我们是在48h换影谁投聚鱼井神翻液的。
5. MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导阶新相周谓必觉失面致MTT比色OD值的升高。
6. 理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。
7. 实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT族名田章、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
8. 避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养急屋面减站酸决介属或液培养细胞时，高的血值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
mtt 步骤把握
MT乡久包包到杆达距良散T溶液的配制方法
通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0女提存神收结班.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
苦 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候父刚化静米载，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心，有条件最好带那种透明的簿膜手套，配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感;往9景讲6孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。
配制MTT时用用PBS溶解，也有人用生理克毫天了进兴盐水配，60℃水浴助溶。
效持怀李量PBS配方:
Nacl 8g
Kcl 0.2g
Na2HPO4 1.44g
KH2PO4 0.24g
调既还pH 7.4
定容1L
贴壁细胞
1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。
2. 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度的药物，原则厚提胜执行上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般5-7个梯度，每孔100ul，设3-5个复孔，建议设5个，否则难以反应真实情况。
3. 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4. 每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5. 终止培养，小心吸去孔内培养液。
6. 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡0.5min，使结晶物臜(Zā)充分溶解。在酶联免疫检测仪OD 560nm处测量各孔的吸光值。
7. 同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。
悬浮细胞
1. 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×10/ml，按次序将:①补足的1640(无血清)培养基40ul;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释(储存液100mg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×10cell/孔)，共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100ml 1640)。
2. 置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
3. 每孔加入10ul MTT溶液(5 mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养4h。(悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4h后可跳过步骤4，直接酶联免疫检测仪OD 560nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)。
4.离心(1000转x10min)，小心吸掉上清，每孔加入100ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD 560nm(630nm校准)测量各孔的吸光值。
接种(铺板)
细胞过了30代以后就不要用了，因为状态不好了;培养板要用好的(最好进口板)，不好的板或重复利用的板只可做预实验。
接种时最好按照预实验摸索出的密度接种，因为细胞密度在10000/ml左右时，所测得的OD值的区间即细胞抑制率(或者增值率)的所呈现的线性关系最好，结果最可信。如果铺的太稀细胞的杀伤不会很明显，太密细胞可能都会凋亡，因为细胞长的太快营养会不够，最后导致死亡。且而细胞过密或者过少，增殖都会过快或者过慢，其增值率线性关系不佳。故而MTT细胞密度多采用10000/ml，100ul/孔。
细胞密度要根据不同细胞的特点来定。如果你做的药品对细胞具有刺激作用那么取小点的细胞浓度，如果你做的药品对细胞具有抑制作用那么取大点的细胞浓度，这样与对照的区别更明显，数据更好。悬浮细胞每孔的细胞数可达到10，贴壁细胞可为10-10。
其它的声音
1. 首先细胞的接种密度一定不能过大，一般每孔1000个左右就够了，我认为宁少勿多。尤其是对于肿瘤细胞。10000/孔是太高了，这样即使药物有作用，MTT方法也是表现不出的，最佳点板浓度在4000-5000/孔，太少的话SD值会很大。(对于不同的细胞，每孔细胞数要摸索一下，对照组OD在1.4以下为佳，当然通常来说更不要超过2。)
2. MTT本身就是比较粗的实验，增殖率10%左右的波动都不算奇怪。特别是新手，20%的波动也是常见的，所以很可能是技术原因引起的，特别是种板技术一定要过关。
3. 我做的是肿瘤细胞的MTT实验，这种细胞长的很快一开始我是用100000/ML的浓度来接种的，结果细胞长的太满结果是没有梯度也没有线性关系。后来调整浓度，用过40000~80000/ML的浓度都做过MTT实验，结果发现做的结果比较好点的是60000~70000/ML的浓度组的。用40000/M的浓度的组，由于细胞少，药物作用的梯度还是有，只是没有很好的线性关系。还有根据细胞生长速度以及药物的特性(有时间依赖性和浓度依赖性的药物)来确定培养时间是48小时还是72小时。
注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。加样器操作要熟练，尽量避免人为误差。虽然移液器比移液管精确得多，但是如果操作不熟，CV会在8%左右。另外，吹散次数过多也会影响细胞活力。所以要熟练些、快些上板。
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